Молекулярно-генетический скрининг соматических мутаций (делеции и инсерции в 19 экзоне, T790M, L858R) в гене EGFR в биопсийном (операционном) материале методом ПЦР (кач., Операционный материал)

Подготовка к исследованию

Специальной подготовки к исследованию не требуется.

Описание

Рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) – это один из рецепторов, активация которого приводит к запуску сигнального пути EGFR-RAS-RAF-MEK-MAPK, вовлеченного в процессы пролиферации, апоптоза и ангиогенеза. Активирующие соматические мутации в гене EGFR могут привести к неконтролируемому делению и выживанию онкотрансформированных клеток. Соматические мутации в гене EGFR характерны для немелкоклеточного рака легкого. Чаще всего мутации возникают в 18-21 экзонах, кодирующих участок киназного домена рецептора. Приблизительно 90% активирующих мутаций составляют делеции в 19 экзоне и замена тимина на гуанин в 21 экзоне (L858R). При мутациях в гене EGFR в клетке (активирующие) вырабатывается аномальный рецептор, который способен активировать свой сигнальный путь независимо от связывания с фактором роста, инициируя тем самым процесс злокачественной трансформации. Мутации приводят к повышению пролиферации опухолевых клеток, росту опухоли, стимуляции ее внедрения в окружающие ткани и метастазирования. Пони мание и возможность исследовать сигнальный путь EGFR в онкогенезе послужило стимулом к созданию препаратов, способных воздействовать на этот механизм, – ингибиторов EGFR: гефитиниб (иресса), эрлотиниб (тарцева) и афатиниб (гиотриф). Это специфические препараты, молекулярные формулы которых проникают в раковые клетки, ингибируют тирозинкиназы - ключевые ферменты патологического сигнального пути - и препятствуют передаче пролиферативных стимулов.
Наличие активирующих мутаций является показанием для назначения таргетной противоопухолевой терапии ингибиторами EGFR-тирозинкиназы 1 (гефитиниб, эрлотиниб) или 2 поколения (афатиниб). Мутация T790M редко обнаруживается в первичных опухолях и чаще (41-62% случаев) возникает, как вторичная, при раке легкого у пациентов с активирующими мутациями в гене EGFR при развитии резистентности к гефитинибу]. Это диктует необходимость перехода на ингибиторы EGFR-тирозинкиназы следующего 3 поколения: осимертиниб. Частота встречаемости других мутаций в гене EGFR, связанных с разной чувствительностью к таргетной терапии, для инсерции в 19 экзоне составляет менее 1%. Для выбора специфичного, таргетного ингибитора тирозинкиназы (ИТК) необходимо определение соответствующих мутаций в гене EGFR.
Терапия немелкоклеточного рака легкого через 8-12 месяцев может становится неэффективной даже с выявленными мутациями гена EGFR ингибиторами тирозинкиназ 1 и 2 поколения (гефитиниб, эрлотиниб, афатиниб). В 60% случаев причина – это появление мутации Т790М, обуславливающей резистентность опухоли к этим препаратам. Поэтому при признаках прогрессирования заболевания на фоне терапии ингибиторами тирозинкиназ необходимо проведение тестирования на мутацию Т790М в гене EGFR. Важно, что на исследование должен направляться материал, полученный после прогрессирования опухоли.

Показания к назначению

• Протокол терапии низкомолекулярными ингибиторами EGFR у пациентов с немелкоклеточным раком легкого (как местнораспространенные, так и метастатические стадии).
• Назначается при наличии гистологически верифицированного немелкоклеточного рака легкого - впервые выявленные, рецидивирующие и метастатические опухоли.

Интерферирующие факторы

Влияет на результат нарушение техники фиксации биопсийного материала, которое может привести к деградации генетического материала и невозможности тестирования.

Метод:

ПЦР с детекцией в режиме реального времени;

Анализатор:

Детектирующий амплификатор ДТ-96, ДНК-Технология, Россия;

Аналитическая чувствительность тест-системы:

95%

Аналитическая специфичность тест-системы:

99%